Volume 41, Issue 4

Zusammenfassung Eine Allergiediagnostik beruht auf einer gründlichen Anamnese, Sensibilisierungstests und Provokationstests zur objektiven Bestätigung des verursachenden Allergenes unter kontrollierten Bedingungen. In dieser Übersicht werden die verfügbaren molekularen und zellulären Tests zur Allergensuche beschrieben. Seit der Identifikation, Klonierung und Expression des Hauptallergens der Birkenpollen, Bet v 1, haben sich die molekularen Einsatzmöglichkeiten in der Allergiediagnostik enorm gesteigert. In einer frei verfügbaren Monographie der European Academy of Allergy and Clinical Immunology (EAACI), dem „Molecular Allergy Users Guide 2016“, werden die Möglichkeiten einer modernen molekularen serologischen Diagnostik detailliert beschrieben. Auch die zelluläre Diagnostik hat sich in den letzten Jahren rasch weiterentwickelt mit der Möglichkeit molekulare Allergene einzusetzen und dem Ziel eine wiederholte Exposition des Patienten mit dem Allergen zu vermeiden. Exakte Messungen sind von externer Qualitätssicherung abhängig, die für die Serumdiagnostik bereits vorhanden ist und in der zellulären Diagnostik derzeit entwickelt wird. Mit der europäischen Standardisierung der diagnostischen Tests im Labor erweitert sich die Palette der Möglichkeiten zur persönlichen Allergiediagnostik.

Zusammenfassung Primäres Ziel von ICAP (internationaler Konsens für antinukleäre Antikörpermuster) ist es, einen Konsens zu finden zur Beschreibung der Fluoreszenzmuster, die mit indirekter Immunfluoreszenztechnik auf HEp-2-Zellen erkannt werden können. 28 Muster (14 Kern-, 9 zytoplasmatische und 5 mitotische Muster) wurden bisher definiert. Neben der Musterbeschreibung wurden alle Muster auch mit AC-Nummern gekennzeichnet, um eine von der Sprache unabhängige Vergleichbarkeit zu gewährleisten. Alle ICAP-Ergebnisse können von der ICAP-Internetseite (www.anapatterns.org) abgerufen werden. ICAP ist ein fortlaufender Prozess. Das nächste und 4. ICAP-Treffen wird im September 2017 im Rahmen des 13. Autoantikörpersymposiums in Dresden stattfinden (www.gfid-ev.de). Anstehende ICAP-Aufgaben sind die Ergänzung der Fluoreszenzmuster, die Erweiterung der Bildersammlung und die genauere Beschreibung der klinischen Bedeutung einzelner Muster.

With big data algorithms and artificial intelligence (AI) at stake the optimal assembly of the most appropriate lab assays selected to diagnose, treat and follow up patients suffering from well-delineated disease may get lost. The physician ordering a lab test, instead of asking for a good composition of screening tests is tempted to order a large number of assays, including genome sequencing hoping to find the diagnostic evidence for his/her patient at once. Four major specialities of medical laboratory assays, i.e. clinical chemistry, hematology, immunology and microbiology are embraced by genome sequencing techniques and have attained the degree of robotics, facilitating assays to such a degree, that the prescriber is free of concern as to how costly/complicated an investigation might become. Diagnostics with autoimmune diseases is not an exemption and autoantibody screening using multiplex assays or therapeutic drug monitoring to adjust treatments of inflammatory/autoimmune diseases is bound to become more and more informative even more so as the pharmacodynamics of modern pharmaceutical agents are explored. As the most appropriate therapeutical agents to monitor in the lab, biological response modifiers, immunosuppressants and monoclonal antibodies are at the forefront and we need to explore their efficacy and side effect profiles not only using phase III clinical studies but also by using postmarketing surveillance. Behind the profiles provided by big data and artificial intelligence, the therapeutically-induced regained immune balance can thus be traced to the single best lab assay. The next decade promises a series of new assays, e.g. inflammasome profiles, lymphocyte markers by fluorescence activated cell sorters as well as single cell secretome analysis.

Zusammenfassung Die Bestimmung der kardialen Troponine ist von erheblicher diagnostischer Bedeutung zur Abklärung vermuteter kardialer Ischämien. In einem Kliniklabor war aufgrund äußerer Umstände (Geräteausfall) aufgefallen, daß die als Backup eingesetzten lateral flow-Schnellteste (qualitative „Kartenteste“ ohne Geräteplattform) auch an hoch positiven Proben (weit über den angegebenen Nachweisgrenzen) in einigen Fällen kein positives Ergebnis erbrachten. Diese zunächst zufällige Beobachtung wurde an einer größeren Serie positiver Proben (n=23>0,5 ng/mL Troponin I; n=17>1,0 ng/mL) systematisch unter Verwendung verschiedener lateral-flow-Teste in Vergleich zu zwei verschiedenen Zentrallabor-Troponin-I-Testen überprüft. Im Ergebnis zeigte keiner dieser Schnellteste die positiven Proben zuverlässig an. Damit sind alle untersuchten qualitativen Troponin-Schnellteste als Basis klinischer Entscheidungen ungeeignet.

Early non-invasive detection of lung cancer is a precondition for enabling better prognosis supported by new innovative therapy regimes. The aim of our study was to evaluate angiogenic and inflammatory proteins in exhaled breath condensate (EBC) as markers for lung cancer. Our report presents a diagnostic study of vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in EBC of 300 individuals, 84 patients with lung cancer, 111 patients with stable chronic obstructive pulmonary disease (COPD), and in 105 healthy controls. Detection of VEGF and bFGF in EBC was applicable to discriminate cancer patients from COPD patients as well as from healthy volunteers. Especially VEGF seems to be suitable to discriminate between non-small cell lung cancer (NSCLC) patients and control groups with highest VEGF values in EBC of patients with progressive NSCLC. The concentration of angiogenic factors correlated with disease progression as well as higher tumor stage. This study supports cytokine analysis in EBC as a suitable noninvasive diagnostic screening method for lung cancer detection and monitoring.

Background: Circulating free DNA (cfDNA) digestion with methylation sensitive restriction enzymes constitutes an important diagnostic tool for differentiating methylated from non-methylated DNA sequences. In the context of pregnancy, this is used to differentiate fetal from maternal DNA. Current protocols are of long duration and use multiple enzymes with different incubation and inactivating temperatures. We describe a short protocol for the digestion of circulating free DNA focused on its future adaptation to miniaturized microfluidic devices based on lab-on-a-chip technology. Methods: cfDNA was extracted from plasma samples of pregnant and non-pregnant women with chemagic Viral NA/gDNA and QIAamp circulating nucleic acids kits. For digestion protocol optimization, different methylation sensitive and insensitive restriction enzymes were used. Detection of RASSF1A , SRY and (β-actin) ACTB sequences was performed by real time polymerase chain reaction (PCR). Results: The digestion protocol is optimized to a 3.5 h one-step protocol using the enzymes BstUI, BstY1 and HhaI resulting in a complete digestion of the hypomethylated maternal RASSF1A with a limit of digestion of 3.65E10 gene copies. Conclusions: This work provides a digestion protocol for cfDNA samples with a combination of temperatures (37 °C and 60 °C) and a protocol length (<4 h) which facilitates its adaptation to miniaturized microfluidic devices based on lab-on-a-chip technology. In this technology, the shorter the duration of the protocol, the greater the rate of success and the less sample evaporation.