Volume 40, Issue 2

Zusammenfassung: Die Durchflusszytometrie hat sich in der Labordiagnostik als unverzichtbare Spezialmethode durchgesetzt. Wegen der Besonderheiten in der Analytik vitaler Zellen stellt die Einführung und Gewährleistung von Qualitätsmanagementsystemen eine Herausforderung dar. Zur Qualitätskontrolle und Validierung in der diagnostischen Durchflusszytometrie liegen mittlerweile Erfahrungen vor, die in diesem Beitrag zusammenfassend dargestellt werden. Im Fokus stehen dabei die relevanten Regelwerke für diagnostische Laboratorien und die damit verbundenen Anforderungen an die medizinische Diagnostik, neben den Richtlinien der Bundesärztekammer (RiliBÄK) insbesondere die Akkreditierung nach DIN EN ISO 15189. Dabei werden Faktoren mit Einfluss auf durchflusszytometrische Analysen, Strategien zur Standardisierung und Harmonisierung in der Durchflusszytometrie und Möglichkeiten zur Verifizierung und Validierung im durchflusszytometrischen Labor aufgezeigt. Eine Zusammenfassung häufiger Qualitätsprobleme schließt die Darstellung ab. Abstract: Diagnostic flow cytometry has been established in laboratory diagnostics as an indispensable, deeply specialized method. Because of the special needs of the analysis in vital cells, the introduction and maintenance of quality management systems stays a challenge. Meanwhile, experience has been collected for quality controls and validation in diagnostic flow cytometry. This will be summarized in this article. The focus will be on the relevant rules and regulations for diagnostic laboratories and the associated requirements for medical diagnostics, besides the guidelines of the Bundesärztekammer (RiliBÄK) in particular the accreditation according to DIN EN ISO 15189. In detail, factors with influence on flow cytometry analyses, strategies for the standardization and harmonization in flow cytometry, and possibilities for verification and validation in the flow cytometry laboratory are given. A summary of the most frequent quality problems rounds up this overview.

Abstract: Assays for total and allergen-specific (s) IgE are essential serological tests in the diagnostic work-up of immediate type hypersensitivity reactions and atopic diseases. Technical performance characteristics and clinical utility of IgE tests have been published in international guidelines. In the USA and in Europe, IgE tests are mainly performed by accredited medical laboratories and in Germany they are also performed by allergists carrying an OIII-limited license. Both have to perform continuously internal and external quality control measures including proficiency trials twice a year (in Germany). Due to the heterogeneity of the assay’s core allergen reagents, complex extracts and more recently defined allergenic molecules, and heterologous assay calibration, the results of qualitative and quantitative sIgE tests from different diagnostic manufacturers can vary considerably. Proficiency trial results are subsequently grouped according to each assay type. Passing acceptance criteria depend on national rules and regarding quality management. Future challenges include a more valid quantification of sIgE which would allow true comparisons with the international units for total IgE, and the use of harmonized allergen reagents for the most important allergen sources, which have hampered inter-assay comparability in the past.

Zusammenfassung: Bei systemischen Autoimmunerkrankungen wie der rheumatoiden Arthritis, den Kollagenosen und den Vaskulitiden hat sich seit mehreren Jahren der Nachweis von Autoantikörpern im klinischen Alltag etabliert. Bei Patienten mit rheumatoider Arthritis (RA) gelingt allerdings nur bei 80% der Patienten ein Nachweis des Rheumafaktors (RF) oder anti-citrullinierter Protein/Peptid-Antikörper (ACPA). Als neue Biomarker für die RA gelten anti-CarP-Autoantikörper, die diese Lücke möglicherweise schließen könnten. Bei Kollagenosen erleichtert der Nachweis von ANA (Autonukleäre Antikörper) die Diagnosefindung wesentlich. Zu den ANAs zählen u.a. Anticentromer-AK, anti-Topoisomerase-I-[anti-Scl-70]-AK und anti-RNA-Polymerase-III-AK, die bei Patienten mit systemischer Sklerose nachgewiesen werden können und in den neuen Klassifikationskriterien berücksichtigt werden. Bei der Diagnose eines Antiphospholipidsyndroms spielt der Nachweis des Lupusantikoagulans und der aCL- bzw. anti-β2GPI-Antikörper der Isotypen IgG, IgM und IgA eine entscheidende Rolle. Antineutrophile-zytoplasmatische Antikörper (ANCA) sind wichtiger Bestandteil der Diagnostik bei Vaskultiden kleiner Gefäße und der Nachweis wird zunächst mit einem Screening über Immunfluoreszenztests (IFT) und mit anschließenden Immunoassays zum Nachweis der spezifischen Antikörper gegen Proteinase-3 (PR3) und Myeloperoxidase (MPO) geführt. Durch neue Schnelltestverfahren für anti-GBM-AK, anti-PR3-AK und anti-MPO-AK kann eine frühzeitigere Diagnosestellung bei kritisch kranken Vaskulitispatienten ermöglicht werden. Auch bei der Polymyalgia rheumatica und bei Patienten mit Spondyloarthritiden wird die Identifikation von neuen Biomarkern beschrieben; deren Stellenwert muss allerdings noch in weiteren Studien evaluiert werden.

Zusammenfassung Hintergrund: Als metabolisches Syndrom (MetS) wird ein Symptomkomplex metabolischer Veränderungen bezeichnet, der eng mit Insulinresistenz (IR) assoziiert ist. Cutoff Werte für HOMA-IR, einem Surrogatparameter für IR, zur Identifikation von Probanden mit MetS sind nicht etabliert. Methoden: Insgesamt lagen Querschnittsdaten von 446 Studienteilnehmern im jüngeren Lebensalter (53% Frauen, 28±3 Jahre alt) und 1271 im höheren Lebensalter (52% Frauen, 68±4 Jahre alt) ohne Diabetes vor. MetS wurde nach den IDF/AHA/NHLBI (International Diabetes Foundation/American Heart Association/National Health, Lung and Blood Institute) Kriterien von 2009 definiert. Mittels ROC-Analyse wurden Cutoff-Werte für HOMA-IR berechnet, oberhalb derer Probanden mit MetS mit höchster Sensitivität und Spezifität erkannt werden konnten. Zuletzt wurden binär logistische Regressionsmodelle berechnet. Ergebnisse: Die Prävalenz von MetS betrug 6,7% bei den jungen und 28,3% bei den älteren Probanden. Cutoff-Werte für HOMA-IR, oberhalb derer MetS identifiziert werden konnte, waren HOMA-IR >1,88 (bei jungen Studienteilnehmern; Sensitivität 80%, Spezifität 85,3%, positiv prädiktiver Wert 80%, negativ prädiktiver Wert 15%) und HOMA-IR >1,98 (bei den älteren Studienteilnehmern; Sensitivität 73,6%, Spezifität 72,9%, positiv prädiktiver Wert 74%, negativ prädiktiver Wert 27%). Patienten oberhalb dieser Cutoff-Werte hatten im höchst adjustierten (Alter, BMI, Geschlecht, körperliche Aktivität und getrennt nach Altersgruppen) binären Regressionsmodell Odds von 5,7 (95% CI: 4,1–7,9) bei älteren und 22,2 (95% CI: 7,0–70,5) bei jüngeren Studienteilnehmern, MetS aufzuweisen. Schlussfolgerungen: Cutoff-Werte für HOMA-IR sind im Klinikalltag nicht etabliert, könnten aber herangezogen werden, um Personen mit MetS zu identifizieren und gegebenenfalls frühzeitig eine Therapie einzuleiten, auch wenn aufgrund der negativen prädiktiven Werte eine Diagnostik des MetS durch HOMA-IR allein nicht erfolgen kann.

Background: One of the first line treatments for relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) is interferon-β (IFNb), a cytokine with immune-modulatory effects. There is a high degree of variability in the response to the drug which is, among other factors, due to the presence of neutralizing antibodies (NABs) occurring late during therapy. Methods: The objective of this study was to determine whether the response to IFNb therapy and NAB development can be predicted based on the expression levels of the type-I interferon receptors IFNAR1, IFNAR2a, IFNAR2b, and IFNAR2c before start of treatment. The IFNAR expression levels in 163 samples of patients with relapsing-remitting MS were measured by real-time polymerase chain reaction (PCR). Results: Pre-treatment IFNAR2c expression levels were somewhat lower in patients who developed NAB during treatment compared to NAB-negative patients. No significant differences in the expression levels of other IFNAR subtypes and isotypes were found. Baseline IFNAR levels were not predictive of the clinical response after 2 years. Conclusions: Overall, there was a small, non-significant effect of IFNAR2c baseline levels on NAB development but no relation to clinical endpoints. Lower expression of IFNAR2c receptors could lead to higher IFNb levels inducing a higher rate of antibody response.

Zusammenfassung In unserem Labor finden wir immer wieder bei der Durchführung der Serumelektrophorese oder bei der umfangreichen Liquordiagnostik (Reiber-Schema) als sogenannte Zufallsbefunde monoklonale Gammopathien. Sollten in der Tat keine klinischen Symptome hierfür charakteristisch sein so sprechen wir von der monoklonalen Gammopathie unbestimmter Signifikanz (MGUS). In der beiliegenden Publikation habe ich einen echten Zufallsbefund und zwei vermeintliche Zufallsbefunde beschrieben.

Background: Capillary glucose (CG) measured with point-of-care glucometers can provide useful approximation of plasma glucose (PG) in selected circumstances but the validity of measurements has been adequately assessed only for a few glucometers. Methods: We assessed the difference between CG measured with a glucometer (Contour Ascensia, Bayer) and PG measured with a standard laboratory method in participants to a population-based cardiovascular survey in the Seychelles (sample size 1227). Results: CG correlated well with PG (r=0.94; p<0.001). The overall difference between PG and CG was –0.55 mmol/L for PG <4.0 mmol/L (n=19; 95% CI –0.92; –0.18); 0.14 mmol/L for PG 4.0–4.9 (n=344; 95% CI 0.08–0.20) and increased according to PG up to 1.64 mmol/L for PG >9.0 mmol/L (n=68; 95% CI 1.36; 1.91). The prevalence of diabetes in the study sample was 29% lower with CG than with PG (8.6% vs. 12.1%) but this bias could be corrected by analytical re-calibration. Conclusions: CG underestimated PG, although the bias was small among persons with low glycemia. This systematic difference may bear little significance when the purpose is to simply monitor blood glucose but has large impact on prevalence estimates at the population level if CG values are not adequately calibrated.

Abstract: The DGKL Working Group Guide Limits (Arbeitsgruppe Richtwerte) has published a proposal for deriving permissible analytical uncertainty limits related to biological variation data. Reference intervals were used to estimate biological variation. Biological variation data as basis for permissible uncertainty limits are generally accepted. These concepts usually apply a fixed factor leading to unrealistic stringent limits for quantities with a relatively small biological variation and to very permissive limits for quantities with relatively large biological variation. The working group has suggested a non-linear relation between biological variation and permissible uncertainty limits. The new approach has been exemplified with 84 quantities listed in the RiliBÄK (official German guidelines). The algorithms published allowed to derive permissible limits for all quantitative measurands in laboratory medicine. After its publication, three supplements appear necessary: 1. additional specifications of standard uncertainty, 2. a discussion on permissible limits for diagnosis and monitoring purposes, and 3. a discussion on circular reasoning in our approach.

Background: Acute coronary syndrome defines a broad spectrum of complaints from angina to irreversible myocardial damage. There is an ongoing need for a biomarker to predict and diagnose acute myocardial infarction (AMI) in the early stage. In this study, our aim was to reveal early diagnostic value of butyrylcholinesterase (BChE) in discrimination of healthy subjects and patients with AMI. Methods: Eighty-five patients admitted to our hospital due to AMI and 45 healthy subjects were involved in the study. Patients and controls were compared according to BChE, lipid profiles and biochemical parameters. Results: The serum BChE activity was significantly lower in patients with AMI than in the controls (p<0.001). After correlation analysis, while a negative correlation was determined between the serum BChE concentrations and AMI presence (r=–0.363, p<0.001); a positive correlation was determined between the serum BChE and cholesterol (r=0.443, p<0.001), HDL (r=0.243, p=0.006) and LDL (r=0.369, p<0.001) levels. The data indicate that BChE is associated with AMI and a subsequent receiver operating characteristic curve (ROC) analysis revealed that BChE, as an independent indicator, may differentiate AMI patients from controls. A cut-off point set at ≤7.15 kIU/L, BChE showed a sensitivity of 51.2% and a specificity of 84.4% (AUC=0.719, p<0.001). Conclusions: Low BChE level was significantly associated with AMI when compared to healthy subjects. Even though it has low sensitivity, plasma levels of BChE might represent an additional marker in the diagnostic network of AMI.