Volume 29, Issue 5

In response to proposals of scientific associations the German Medical Association recommended the use of international standard procedures for the determination of enzymes and a change of the measurement temperature to 37°C in 1992. According to the recommendations, reference intervals for the new reference procedures should have been published by 1995. After a transition period, which had been extended several times, the clinical chemistry laboratories finally had to follow the recommendations and to use the new IFCC reference procedures as of April 1, 2003. However, reference intervals evaluated in a multicentre study have not been published until now. There is only one German study on preliminary upper reference limits of five enzymes in serum of hospitalized subjects using the new IFCC reference procedures. Since no multicentre study is intended in the near future, an expert working group of DGKL and VDGH recommended the use of preliminary reference intervals on enzymes in serum until final values have been determined. The interim values result from experiences of the past 3 years, from previous studies in different countries using comparable methodologies, or were derived from reference intervals obtained at 25°C and converted by method and temperature conversion factors.

Zusammenfassung Die Analyse von spezifischen Proteinen im zweiten Morgenurin, bezogen auf den Kreatiningehalt der Probe, erlaubt heute nicht nur den Nachweis oder den Ausschluss von Nierenerkrankungen, sondern darüber hinaus auch die Differenzierung und Verlaufskontrolle von Nephropathien. Störungen lassen sich aufgrund ihres Markerproteinprofils in solche mit hauptsächlich glomerulärem oder tubulärem Anteil und zusätzlich in weitere Untergruppen einteilen. Im Zusammenhang mit den Teststreifenresultaten kann die Quelle einer Blutung mit spezifischen Quotienten näher eingegrenzt und Kontaminationen können von tatsächlichen renalen Proteinurien unterschieden werden. Eine Plausibilitätsprüfung und Interpretation der erhaltenen Ergebnisse ist unbedingt erforderlich. Da eineVielzahl von Regeln überprüft werden muss, ist eine Berechnung und Darstellung der Ergebnisse nur mit Hilfe von wissensbasierten Systemen in Kombination mit einer grafischen Befunddarstellung sinnvoll.

Zusammenfassung Die SDS-Discelektrophorese (SDS-PAGE) trennt Proteine nach dem Molekulargewicht und erlaubt die qualitative und semiquantitative Analyse der mit dem Urin ausgeschiedenen Eiweiße. Im Gegensatz zur Einzelproteinanalyse werden keine Konzentrationen von Markerproteinen gemessen, sondern es werden alle im Urin vorhandenen Proteine mit einem Molekulargewicht zwischen etwa 10 und 800 kDa dargestellt. Da die pathophysiologischen Prozesse im Nephron sich im Wesentlichen in der molekularen Größe der Urineiweiße widerspiegeln, lassen die elektrophoretischen Muster Rückschlüsse auf das Vorliegen einer glomerulären und/oder tubulären Schädigung und auf prä- und postrenale Prozesse zu. Sie ermöglichen somit die Bestimmung der Lokalisation der Erkrankung am Nephron, nicht aber die Diagnose der zugrunde liegenden Ursache. Im klinischen Alltag gibt die Untersuchung damit wertvolle Hinweise auf die Natur der Erkrankung und leistet Hilfestellung bei der Entscheidung, ob eine Biopsie zur weiteren Abklärung erforderlich ist. Daneben liefert sie insbesondere bei Verlaufsuntersuchungen Hinweise in Bezug auf die Prognose und lässt bei Veränderungen im Verlauf Remissionen, Rezidive und Progression erkennen.

Zusammenfassung Die Kapillarelektrophorese wird in einigen medizinischen Laboratorien seit mehreren Jahren zur Serumprotein-Elektrophorese verwendet. Der Einsatz der Kapillarelektrophorese in der Urindiagnostik beschränkt sich hingegen bis heute auf einige wenige Machbarkeitsstudien und Forschungsanwendungen. Diese Arbeit zeigt die Entwicklung der Kapillarelektrophorese bis zu einer gerade kürzlich erschienenen neuen Version einer kommerziellen Urinelektrophorese von Beckman Coulter. Man kann gespannt sein auf die ersten Berichte zu dieser Anwendung.

Zusammenfassung Die Technik der Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) ist eine wichtige Methode, mit welcher Nukleinsäuresequenzen im Zellkern nachgewiesen werden können. Sie hat inzwischen in der Diagnostik und Klassifikation von hämatologischen Neoplasien einen festen Stellenwert. Die Durchführung eines diagnostischen FISH-Assays setzt voraus, dass die Sequenz der zu untersuchenden genetischen Region bekannt ist. Durch das zunehmende Wissen über die genetischen Veränderungen bei Tumoren konnten FISH-Assays für viele klinisch relevante Fragestellungen entwickelt werden. Grundsätzlich können für diverse Fragestellungen Sonden für eine FISH-Untersuchung hergestellt werden, sofern die zu untersuchende genetische Veränderung molekular aufgeklärt und prinzipiell mit FISH erfassbar ist, wie dies bei Deletionen, Translokationen, Duplikationen, Inversionen sowie Zugewinnen und Verlusten ganzer Chromosomen der Fall ist. Kleine Mutationen innerhalb eines einzelnen Gens sind nicht erfassbar. Viele für die Diagnostik wichtige Sonden sind bereits kommerziell erhältlich. Eine Empfehlung zum Einsatz der FISH-Diagnostik bei Leukämien wird zur Zeit im Rahmen des Europäischen Leukämie-Netzes erarbeitet (www.leukemia-net.org).

Monitoring minimal residual disease (MRD) becomes increasingly important in the risk-adapted management of patients with acute myeloid leukemia (AML). The two most sensitive and also quantitative methods for MRD detection are multiparameter flow cytometry (MFC) and real-time PCR (QRT-PCR). Fusion gene-specific PCR in AML is based on the RNA level while MFC evaluates MRD levels based on cell counts. Both methods have been demonstrated to independently impact the patients' prognosis. The strong power of MFC has been shown mainly in the assessment of early clearance of the malignant clone. MRD levels in AML with fusion genes have the strongest prognostic power after the end of consolidation therapy. In addition, with QRT-PCR, highly predictive initial expression levels can be assessed. With both methods, early detection of relapse is possible. Today, validated PCR-based MRD is being done not only with fusion genes that are detectable in only 20–25% of all AML, but also with new molecular markers like FLT3-mutations, NPM-mutations, MLL-PTD, WT1, and EVI1 expression. Thus, in 80–90% of all AML, a marker for PCR is available that can be detected with a sensitivity of 1:10,000 to 1:1,000,000. In contrast, MFC based MRD quantification is possible in nearly 100% of all AML. However, in some cases the sensitivity is somewhat lower than with PCR. Large clinical trials will determine the role and place of immunologic and PCR-based monitoring in the prognostic stratification of patients with AML.

Background: Allo- and autoantibodies against membrane structures of human platelets cause different types of immune thrombocytopenic disorders and require a sensitive and specific assay. The well-established monoclonal antibody immobilization of platelet antigens (MAIPA) test is able to distinguish between specifically bound immunoglobulins and coating of membrane-associated immune complexes; but MAIPA is rather time consuming and requires 2×10 7 platelets or more. For patients with very low platelet count and for little children with small blood volume, this may present a serious limitation. Methods: The advantages of flow cytometry and of modern microsphere technology were combined with the selectivity of MAIPA to overcome the disadvantages of this assay. In order to compare different types of beads, i) goat anti-mouse Ig-labelled magnetic beads, ii) dyed polymeric beads designed for multiplexed assays, and iii) blanc polymeric beads have been studied. After loading with glycoprotein-specific or anti-β 2 -microglobulin-specific antibodies, these beads could be stored for months at 4°C without substantial loss of sensitivity. Glycoproteins from platelet membranes, loaded with platelet-specific auto-/alloantibodies, have been immobilized on the bead surfaces during detergent solubilization of platelets prior to labelling with anti-human IgG-Biotin and Extravidin ® R-Phycoerythrin. Results: Magnetic beads are very easy to handle, show strong signals and low nonspecific binding, but have stronger autofluorescence compared to polymeric beads. Polymeric beads have low autofluorescence but stronger tendency to nonspecific binding. All types of beads tested in this study can be used to detect antibodies against platelet antigens, even against glycoproteins with low frequency such as anti-HPA-5 autoantibodies and with as few as 10 6 platelets or less. In multiplexed settings, they are suitable for simultaneous detection of multiple antibodies. Conclusions: Flow cytometry is a fast and sensitive method for a bead-based MAIPA assay and is especially useful for low platelet counts and for pediatric patients. It is further improved by the use of multiplexed beads.

Assessment of platelet activation after ischemic stroke could be clinically valuable if platelet markers existed that predict the risk of recurrent events and reflect the effect of antiplatelet therapy. Recently developed techniques such as the detection of activation-dependent neoantigens on the platelet surface by flow cytometry, the platelet function analyzer (PFA), or whole blood aggregometry represent methods that in the future could become helpful tools in stroke care. Studies showed an increased expression of activation-dependent markers such as CD62p (p-selectin) or CD63 after ischemic stroke, however, for these and other parameters it remains unclear whether an increased expression at any time point after stroke heralds an increased risk of future events. Sufficiently powered studies on the predictive value of platelet activation parameters and on effects of antiplatelet agents on these parameters after stroke are required in order to validate the potential clinical usefulness of these recently developed techniques.

Zusammenfassung Thrombozyten haben eine zentrale Bedeutung bei der Arteriosklerose und auch bei akuten thrombotischen Ereignissen. Körperliche Aktivität besitzt ein hohes Potential zur Vermeidung von Gefäßerkrankungen, dagegen wird intensiven Belastungen ein mögliches Risikopotential bei der Auslösung kardiovaskulärer Ereignisse zugeschrieben. Bei den notwendigen Untersuchungen thrombozytärer Funktionszustände nach körperlicher Belastung und Training werden zunehmend flowzytometrische Methoden eingesetzt, weil diese Technik die Möglichkeit impliziert, Veränderungen direkt auf der Oberfläche von Thrombozyten zu verifizieren. Da diese Veränderungen nach körperlichen Belastungen recht moderat ausfallen, sind Verfahren mit hoher Sensitivität notwendig. Zur Untersuchung dieser Veränderungen wurden vier Assays aufgebaut: a) Spontanexpression von Aktivierungsantigenen, b) Stimulationsassay, c) Thrombozyten-Leukozyten-Konjugate spontan und d) stimuliert. In einigen Untersuchungen konnte eine erhöhte CD62P- und PAC-1-Expression auf der Oberfläche von Thrombozyten nach körperlicher Belastung bei Gesunden nachgewiesen werden. Während die Untersuchungen der CD62P-Expression auf unstimulierten Thrombozyten nach körperlicher Belastung bei geringen Veränderungen uneinheitliche Resultate zeigen können, führen körperliche Belastungen im Stimulationsversuch regelhaft zu einer erhöhten Thrombozytenreaktivität. Obwohl der Bildung von Thrombozyten-Leukozyten-Konjugaten zunehmende analytische Bedeutung zukommt, wurden belastungsinduzierte Veränderungen der Konjugate bisher kaum untersucht. In den wenigen vorliegenden Studien konnte aber gezeigt werden, dass es nach körperlichen Belastungen zu einer Zunahme an Thrombozyten-Leukozyten-Konjugaten sowie auch ihrer Subpopulationen kommt, welche sich aber sehr schnell wieder auflösen. Die Ergebnisse zeigen, dass ein Stimulationsassay sowie die Bestimmung der Thrombozyten-Leukozyten-Konjugate sensitivere Verfahren darstellen als die Bestimmung von spontanen Aktivitätsmarkern wie z.B. das CD62P. Zusammenfassend sind die beschriebenen Methoden nicht nur für Untersuchungen von physiologischen Veränderungen bei Thrombozyten einsetzbar, sondern können auch ohne weiteres bei der Untersuchung von pathologischen Zuständen verwendet werden.

Zusammenfassung Im vorliegenden Fall wird von einer Fehldiagnose auf der Grundlage eines falsch-reaktiven Anti-HCV-Tests und eines falsch-reaktiven HCV-Nukleinsäureamplifikationstests (NAT) berichtet, die bei einem 58-jährigen chirurgischen Oberarzt im Rahmen einer arbeitsmedizinischen Vorsorgeuntersuchung im krankenhauseigenen Labor gestellt wurde und zu einem knapp zweimonatigen Berufsverbot führte. Basis dieser Fehldiagnose war ein wiederholt schwach reaktiver HCV-Antikörper-ELISA, der mit einem Nukleinsäureamplifikationstest, der ebenfalls schwach positiv ausfiel, überprüft wurde. Ein Antikörperbestätigungs- bzw. Ergänzungstest (Immunoblot) wurde nicht durchgeführt. Die Fehldiagnose ist jedoch nicht durch einen Testfehler, sondern durch ein Missverständnis entstanden, indem beim Kliniker zwei Laborindizien zu einem Beweis aufsummiert wurden.

Themen: Dermatophyten Morphologische und physiologische Differenzierungsmerkmale von Dermatophyten; Katzenmikrosporie, MALDI-TOF MS (Massenspektroskopie) zur Identifizierung von Bakterien und Pilzen; inclusive Dermatophyten, DNA-Diagnostik von Pilzen; Fusarien und deren Toxine in Getreide; Trichophyton mentagrophytes . Mikroskopierkurs: Differenzierung von häufigen und seltenen Dermatophyten-Arten Termin Freitag, 4. November 2005, 10.00 bis 16.00 Uhr Tagungsort Vorträge: Kursraum der Universitätshautklinik Leipzig, Klinik für Dermatologie, Venerologie und Allergologie Universitätsklinikum Leipzig D-04103 Leipzig Praktischer Kurs: Mikroskopiersaal des Instituts für Anatomie der Universität Leipzig Wissenschaftliche Leitung PD Dr. med. P. Nenoff: Laboratorium für medizinische Mikrobiologie Mölbis Dr. med. Dagmar Rimek: Thüringer Landesamt für Lebensmittelsicherheit und Verbraucherschutz, Erfurt Prof. Dr. med. Jan C. Simon: Klinik für Dermatologie, Venerologie und Allergologie, Universitätsklinikum Leipzig Organisatorische Leitung PD Dr. med. P. Nenoff Laboratorium für medizinische Mikrobiologie Partnerschaft Dr. rer. nat. Jürgen Herrmann und Priv.-Doz. Dr. med. Pietro Nenoff, Straße des Friedens 8, D-04579 Mölbis Tel. 034347-50 323; Fax 034347-50 123 e-mail info@mykologie-experten.de

Human Papillomaviruses Methods and Protocols The Humana Press, 999 Riverview Drive, Suite 208, Totowa, New Jersey 07512, USA Edited by: Clare Davy and John Doorbar National Institute for Medical Research, London, UK Publ. Date: 08/15/2005 496 pages, Methods in Molecular Medicine™/119 6×9 ISBN: Hardcover 1-58829-373-4 $ 145.00 £ 85.50 Full Text 1-59259-982-6 $ 145.00 Drugs of Abuse Body Fluid Testing The Humana Press, 999 Riverview Drive, Suite 208, Totowa, New Jersey 07512, USA Edited by: Raphael C. Wong, MS, MBA Branan Medical Corporation, Irvine, CA, USA and Harley Y. Tse, PhD, MBA Wayne State University School of Medicine, Detroit, MI, USA Publ. Date: 06/23/2005 312 pages, Forensic Science and Medicine™ 6×9 ISBN: Hardcover 1-58829-435-8 $ 145.00 £ 85.50 Full Text 1-59259-951-6 $ 145.00 Pharmacogenomics Methods and Protocols The Humana Press, 999 Riverview Drive, Suite 208, Totowa, New Jersey 07512, USA Edited by: Federico Innocenti, MD, PhD University of Chicago, Chicago, IL, USA Publ. Date: 08/15/2005 224 pages, Methods in Molecular Biology™/311 6×9 ISBN: Hardcover 1-58829-440-4 $ 99.50 £ 59.00 Full Text 1-59259-957-5 $ 99.50