Band 2, Heft 3

Anti-deoxyribonucleic acid (DNA) antibodies in the clinical laboratory are intimately linked to the diagnosis and monitoring of systemic lupus erythematosus (SLE); however, the characteristics of the analytical methods and the properties of the antibodies themselves are heterogeneous. To review the definition and properties of anti-double-stranded anti-DNA (anti-dsDNA) antibodies, the adequacy of analytical methods, and the clinical requirements for this biomarker. Through PubMed we searched the existing literature with the terms anti-dsDNA, editorial, review, guideline, meta-analysis and SLE. The last search, anti-dsDNA and SLE restricted to the last two years. Information was expanded through related articles and those published in official state bodies related to anti-dsDNA and SLE. Clinical laboratory methods for anti-dsDNA analysis and their characteristics are analyze. The clinical utility of anti-dsDNA in its diagnostic, clinical association and follow-up aspects of SLE is reviewed. There is wide variability in analytical methods and deficits in standardization persist. They are part of the current SLE classification criteria and are used as markers in the follow-up of the disease. Their diagnostic usefulness improves when they are determined in antinuclear antibody (ANA)-positive patients. In follow-up, quantification is of interest, preferably with the same analytical method (given the deficits in standardization).

Resumen Los anticuerpos contra el ácido desoxirribonucleico [DNA] en el laboratorio clínico, están íntimamente ligados al diagnóstico y monitorización del lupus eritematoso sistémico [LES]; no obstante, las características de los métodos analíticos y las propiedades de los propios anticuerpos son heterogéneas Revisar la definición y propiedades de los anticuerpos anti-DNA de doble cadena [anti-dsDNA], la adecuación de los métodos analíticos y los requerimientos clínicos para este biomarcador. A través de PubMed se investiga la bibliografía existente con los términos anti-dsDNA, editorial, review, guideline, meta-analysis y LES. La última búsqueda, anti-dsDNA y LES restringuida a los últimos dos años. Se amplía información a través de artículos relacionados y los publicados en organismos oficiales estatales relacionados con anti-dsDNA y LES. Se analizan los métodos del laboratorio clínico para el análisis de los anti-dsDNA y sus características. Se revisa la utilidad clínica de los anti-dsDNA en sus aspectos diagnóstico, de asociación clínica y seguimiento del LES. Existe una amplia variabilidad en los métodos analíticos y persisten déficits en la estandarización. Forman parte de los criterios actuales clasificatorios de LES y se utilizan como marcadores en el seguimiento de la enfermedad. La utilidad diagnóstica mejora cuando se determinan en pacientes con ANA positivos. En el seguimiento, es interesante la cuantificación, preferiblemente con el mismo método analítico (dado los déficits de estandarización).

Resumen Introducción La aportación del Laboratorio Clínico en el ámbito diagnóstico es cada día mas importante porque gran parte de las decisiones clínicas que se adoptan se basan en nuestros resultados. Contenido La cuantificación en sangre de hormona paratiroidea (PTH) presenta una importante variabilidad analítica debido a la heterogeneidad de sus formas circulantes y a la configuración antigénica de los diferentes métodos disponibles. Esta circunstancia puede tener impacto en aquellas situaciones patológicas que cursan con valores circulantes de PTH excesivamente elevados, como sucede en la enfermedad renal crónica (ERC). Resumen A pesar de la identificación de otras moléculas involucradas en las alteraciones óseas y minerales asociadas a la ERC, como el klotho o el factor fibroblástico 23, los nefrólogos siguen basando sus decisiones terapéuticas en la PTH; el problema es que, el desconocimiento de estos aspectos analíticos en su cuantificación, puede inducir a errores en la interpretación clínica de sus resultados. Perspectiva Esta revisión aborda estas consideraciones desde el Laboratorio Clínico y plantea posibles estrategias futuras, que afectan tanto a la elección del método como a la expresión de los resultados de PTH, con la finalidad de acercarnos más a la realidad del paciente renal, en colaboración con el nefrólogo.

Objectives The contribution of the clinical laboratory to diagnostics is increasingly important since a great deal of clinical decisions rely on laboratory test results. Content Parathyroid hormone (PTH) measurement presents a considerable analytical variability due to the heterogeneity of its circulating forms and the antigenic configuration of the different assays commercially available. Such variability may have an impact on pathological conditions associated with significant increases in circulating PTH, as it is the case of chronic kidney disease (CKD). Summary Despite the recent identification of new molecules involved in bone and mineral disorders associated with CKD, such as klotho or the fibroblastic factor 23 (FGF23), nephrologists still base their clinical decisions on PTH concentrations. The problem is that unawareness of these analytical considerations may cause errors in the clinical interpretation of test results. Outlook This systematic review addresses these issues from the clinical laboratory perspective and proposes new approaches related to PTH method selection and result expression. These new strategies will help laboratory medicine specialists and nephrologist better determine the status of CKD patients.

Elevated plasma bilirubin levels are a frequent clinical finding. It can be secondary to alterations in any stage of its metabolism: (a) excess bilirubin production (i.e., pathologic hemolysis); (b) impaired liver uptake, with elevation of indirect bilirubin; (c) impaired conjugation, prompted by a defect in the UDP-glucuronosyltransferase; and (d) bile clearance defect, with elevation of direct bilirubin secondary to defects in clearance proteins, or inability of the bile to reach the small bowel through bile ducts. A liver lesion of any cause reduces hepatocyte cell number and may impair the uptake of indirect bilirubin from plasma and diminish direct bilirubin transport and clearance through the bile ducts. Various analytical methods are currently available for measuring bilirubin and its metabolites in serum, urine and feces. Serum bilirubin is determined by (1) diazo transfer reaction, currently, the gold-standard; (2) high-performance liquid chromatography (HPLC); (3) oxidative, enzymatic, and chemical methods; (4) direct spectrophotometry; and (5) transcutaneous methods. Although bilirubin is a well-established marker of liver function, it does not always identify a lesion in this organ. Therefore, for accurate diagnosis, alterations in bilirubin concentrations should be assessed in relation to patient anamnesis, the degree of the alteration, and the pattern of concurrent biochemical alterations.

Resumen Un aumento en los niveles plasmáticos de bilirrubina es una alteración frecuente. Puede deberse a cualquier causa que altere alguna de las fases de su metabolismo: a) producción excesiva de bilirrubina (ej. hemólisis patológica); b) defecto en la captación hepática, con aumento de bilirrubina indirecta); c) defecto de conjugación, por alteración del enzima encargada (UDP-glucuronosiltransferasa); y d) defecto de excreción biliar, con aumento de bilirrubina directa, por defectos en las proteínas encargadas de la excreción, o bien por la imposibilidad del paso de la bilis a través de los conductos biliares hasta el intestino. Una lesión hepática de cualquier causa, al disminuir el número de hepatocitos, puede producir una disminución de la captación de bilirrubina indirecta desde el plasma y una disminución del transporte y excreción de la bilirrubina directa hacia los conductillos biliares. Se pueden usar diferentes técnicas analíticas para medir la bilirrubina y sus metabolitos en el suero, la orina y las heces. La bilirrubina sérica se mide mediante (1) la "reacción diazo", actualmente el método de referencia; (2) cromatografía líquida de alta resolución (HPLC); (3) métodos oxidativos, enzimáticos y químicos; (4) espectrofotometría directa; y (5) métodos transcutáneos. Aunque la bilirrubina es un marcador clásico de disfunción hepática, no siempre indica una lesión de este órgano. Por tanto, para obtener un diagnóstico preciso, el significado de las alteraciones de este parámetro biológico ha de valorarse en conjunción con la anamnesis del paciente, la magnitud de la alteración, y el patrón de las alteraciones bioquímicas. acompañantes.

ISO 15189:2012 establishes the requirements for clinical sample management, ensuring quality of process and laboratory information management. The accreditation authority, ENAC in Spain, established the requirements for the authorized use of the label in reports issued by accredited laboratories. These recommendations are applicable to the postanalytical processes and the professionals involved. The Standard requires laboratories to define and document the duration and conditions of sample retention. Laboratories are also required to design an internal quality control scheme to verify whether postanalytical activities attain the expected standards. Information management requirements are also established and laboratories are required to design a contingency plan to ensure the communication of laboratory results. Instructions are finally provided about the correct use of the accreditation label in laboratory reports. A range of nations and scientific societies support that clinical laboratories should be required to obtain accreditation. With ISO 15189 being the most specific standard for demonstrating technical performance, a clear understanding of its requirements is essential for proper implementation.

Resumen La norma ISO 15189:2012 exige una serie de requisitos en cuanto a la gestión de muestras clínicas, el aseguramiento de la calidad del proceso y la gestión de la información del laboratorio. Además, la entidad acreditadora, ENAC en España, tiene establecidas las condiciones para el uso de la marca en el informe de resultados del laboratorio acreditado. Las recomendaciones planteadas aplican a las actividades incluidas en el proceso posanalítico del laboratorio, así como al personal implicado. Se indican los criterios para que el laboratorio defina y documente el tiempo y las condiciones de retención de las muestras, para diseñar un control de calidad interno que verifique si las actividades posanalíticas alcanzan la calidad esperada, los requisitos que debe cumplir la gestión de la información y la necesidad de disponer de un plan de contingencia que asegure la comunicación de los resultados en todo momento. Asimismo, se describe el uso correcto de la marca de acreditación en los informes. Diversos gobiernos y sociedades científicas abogan por la obligatoriedad de la acreditación de los laboratorios clínicos. Siendo la norma ISO 15189 la más específica para demostrar su competencia técnica, es indispensable el conocimiento y la comprensión de sus requisitos para su correcta implantación.

Objectives The strain the SARS-COV-2 pandemic is putting on hospitals requires that predictive values are identified for a rapid triage and management of patients at a higher risk of developing severe COVID-19. We developed and validated a prognostic model of COVID-19 severity. Methods A descriptive, comparative study of patients with positive vs. negative PCR-RT for SARS-COV-2 and of patients who developed moderate vs. severe COVID-19 was conducted. The model was built based on analytical and demographic data and comorbidities of patients seen in an Emergency Department with symptoms consistent with COVID-19. A logistic regression model was designed from data of the COVID-19-positive cohort. Results The sample was composed of 410 COVID-positive patients (303 with moderate disease and 107 with severe disease) and 81 COVID-negative patients. The predictive variables identified included lactate dehydrogenase, C-reactive protein, total proteins, urea, and platelets. Internal calibration showed an area under the ROC curve (AUC) of 0.88 (CI 95%: 0.85–0.92), with a rate of correct classifications of 85.2% for a cut-off value of 0.5. External validation (100 patients) yielded an AUC of 0.79 (95% CI: 0.71–0.89), with a rate of correct classifications of 73%. Conclusions The predictive model identifies patients at a higher risk of developing severe COVID-19 at Emergency Department, with a first blood test and common parameters used in a clinical laboratory. This model may be a valuable tool for clinical planning and decision-making.

Resumen Objetivos Durante la pandemia causada por el virus SARS-CoV-2 ha surgido la necesidad de identificar variables predictivas que permitan una rápida identificación de aquellos pacientes que desarrollarán la COVID-19 severa para una rápida intervención. Este estudio ha desarrollado y validado un modelo capaz de realizar un pronóstico de severidad de la COVID-19. Métodos A partir de datos analíticos, demográficos y comorbilidades de pacientes visitados en el Servicio de Urgencias con sintomatología compatible de COVID-19, se ha realizado un estudio descriptivo y comparativo de pacientes con PCR-RT positiva y negativa para SARS-CoV-2 y de pacientes con enfermedad COVID-19 moderada y severa. La cohorte COVID-19 positiva ha servido para el desarrollo de un modelo de regresión logística. Resultados Se han incluido 410 pacientes COVID positivo (303 con enfermedad moderada y 107 con enfermedad severa) y 81 COVID negativo. Las variables predictivas del modelo son: lactato deshidrogenasa, proteína C reactiva, proteínas totales, urea y plaquetas. La calibración interna mostró un área bajo la curva ROC (AUC) de 0,88 (IC95%: 0,85–0,92), con un porcentaje de clasificaciones correctas del 85,2% a un valor de corte de 0,5. La validación externa (100 pacientes) obtuvo un AUC de 0,79 (IC95%: 0,71–0,89), con un 73% de clasificaciones correctas. Conclusiones El modelo predictivo desarrollado permite seleccionar desde el Servicio de Urgencias, con una única extracción de sangre y con magnitudes habituales en un Laboratorio Clínico, aquellos pacientes que con mayor probabilidad desarrollarán COVID-19 severa, proporcionando una importante herramienta para la planificación y la toma de decisiones clínicas.

Objectives Since commercial SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2) antigen rapid detection tests (Ag-RDTs) display broad diagnostic efficiency, this study aimed to evaluate the clinical performance of Fluorecare SARS-CoV-2 Spike Protein Test Kit in a real-life scenario. Methods The study population consisted of a series of patients undergoing SARS-Cov-2 diagnostic testing at Pederzoli Hospital of Peschiera del Garda (Verona, Italy). A nasopharyngeal swab was collected upon hospital admission and assayed with molecular (Altona Diagnostics RealStar ® SARSCoV-2 RT-PCR Kit) and antigen (Fluorecare SARS-CoV-2 Spike Protein Test Kit) tests. Results The study population consisted of 354 patients (mean age, 47 ± 20 years; 195 women, 55.1%), 223 (65.8%) positive at molecular testing. A significant correlation was found between Fluorecare SARS-CoV-2 Spike Protein Test Kit and Altona (both S and E genes: r=−0.75; p<0.001). The cumulative area under the curve in all nasopharyngeal samples was 0.68. At ≥1.0 S/CO manufacturer’s cut-off, the sensitivity, specificity, negative and positive predictive values were 27.5, 99.2, 41.5 and 98.5%, respectively. Considerable improvement of sensitivity was observed as Ct values decreased, becoming 66.7% in samples with mean Ct values <30, 90.5% in those with mean Ct values <25, up to 100% in those with mean Ct values <20. Conclusions The modest sensitivity and negative predictive value of Fluorecare SARS-CoV-2 Spike Protein Test Kit makes unadvisable to use this assay as surrogate of molecular testing for definitively diagnosing SARS-CoV-2 infection, though its suitable sensitivity at high viral load could make it a reliable screening test for patients with higher infective potential.

Resumen Objetivos A la luz de la elevada eficiencia diagnóstica de las pruebas rápidas de detección de antígenos (Ag-RDT) contra el coronavirus de tipo 2 causante del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2), se realizó un estudio con el fin de evaluar el rendimiento clínico de la prueba de antígenos contra la proteína Spike del SARS-CoV-2 en un escenario real. Métodos La población de estudio estaba formada por pacientes que se sometieron a una prueba diagnóstica ordinaria del SARS-Cov-2 en el Hospital Pederzoli de Peschiera del Garda (Verona, Italia). Se tomó una muestra de exudado nasofanríngeo en el momento del ingreso, que se sometió a un análisis molecular (Altona Diagnostics RealStar® SARSCoV-2 RT-PCR Kit) y de antígenos (Prueba Fluorecare de Antígenos contra la proteína Spike del SARS-CoV-2). Resultados La población de estudio estaba compuesta por 354 pacientes (edad media, 47±20 años; 195 mujeres, 55,1%), de los cuales 223 (65,8%) obtuvieron un resultado positivo en el análisis molecular. Se observó una correlación significativa entre la prueba Fluorecare y Altona (para los genes S y  E : r=−0,75; p<0,001). El área bajo la curva acumulada en todas las muestras nasofaríngeas fue de 0,68. A un índice S/CO ≥1,0, indicado por el fabricante, la sensibilidad, especifidad y valor predictivo negativo y positivo fueron del 27,5%, 99,2%, 41,5% y 98,5%, respectivamente. La sensibilidad se mostró inversamente proporcional a los valores de Ct, llegando al 66,7% en las muestras con valores medios de Ct <30, al 90,5% en aquellas con valores medios de Ct <25, y hasta al 100% en las muestras con valores medios de Ct <20. Conclusiones Dada la modesta sensibilidad y moderado valor predictivo negativo de la prueba de Fluorecare, no se recomienda sustituir con esta prueba el análisis molecular para el diagnóstico de infección por SARS-CoV-2, aunque su adecuada sensibilidad confirma su fiabilidad para el cribado de pacientes con mayor potencial infeccioso.

Objectives Change limits, more commonly called delta check, are those in which a change in a patient’s measured result in relation to their corresponding preceding measurement is suspected of being erroneous and should be considered as a doubtful result. The aim of this study was to provide change limits for some biochemical and haematological quantities to detect doubtful measured results and to assess its effectiveness to detect erroneous results for their application in and the standardization of the plausibility control. Methods Change limits have been estimated for 13 biochemical and 6 haematological quantities. For each quantity, relative differences ( D ), expressed as a percentage between the two consecutive measured results from the same patient (from scheduled laboratory requests), were calculated. From these differences ( D ), the p 5 and p 95 percentiles of the data distribution were calculated. To assess the effectiveness of the change limits to detect laboratory errors, 43 erroneous laboratory reports, containing different biochemical and haematological quantities, were obtained from the standard laboratory plausibility control procedure. Results From the 43 erroneous laboratory reports, 31 (72%) were due to endovenous administration errors and 12 (28%) were due to mislabeling errors. All erroneous laboratory reports were detected when the change limits of the quantities were combined and applied together. Conclusions The best combination of quantities, which detect all the erroneous reports in the same specimen were: potassium, albumin, creatinine, glucose and haemoglobin.

Resumen Objetivos Los límites de cambio, conocidos como deltacheck , son aquellos valores que indican sospecha de que la variación entre el resultado actual obtenido y el resultado anterior de la misma magnitud en un mismo paciente se debe a un error y, por tanto, dicho resultado ha de ser cuestionado. El propósito del presente estudio es establecer los límites de cambio para algunas magnitudes hematológicas y bioquímicas, con el fin de detectar resultados potencialmente erróneos, así como evaluar su eficacia a la hora de detectar resultados erróneos, para estandarizar el proceso de control de la plausibilidad. Métodos Se calcularon los límites de cambio para 13 magnitudes bioquímicas y 6 hematológicas. Para cada magnitud, se calcularon las diferencias relativas (D), expresadas como la diferencia porcentual entre dos resultados consecutivos en el mismo paciente. A partir de dichas diferencias (D), se calcularon los percentiles 5 y 95 de la distribución de datos. Para evaluar eficacia de los límites de cambio se emplearon 43 informes de laboratorio considerados erróneos a partir del procedimiento habitual de control de la plausibilidad utilizado en el laboratorio. Resultados De los 43 informes de laboratorio que contenían algún error, 31 (72%) fueron clasificados como errores de contaminación por administración endovenosa y 12 (28%) como errores en la identificación del paciente. Todos los informes de laboratorio erróneos fueron detectados al aplicar conjuntamente los límites de cambio estimados de las diferentes magnitudes. Conclusiones La mejor combinación de magnitudes en la misma muestra capaces de detectar informes de laboratorio erróneos fue: concentración de potasio, albúmina, creatinina, glucosa y hemoglobina.

Objectives Clinical practice guidelines (CPGs) are recommendations based on a systematic review of scientific evidence that are intended to help healthcare professionals and patients make the best clinical decisions. CPGs must be evidence-based and are designed by multidisciplinary teams. The purpose of this study is to assess the topics related to the clinical laboratory addressed in CPGs and evaluate the involvement of laboratory professionals in the CPG development process. Methods A total of 16 CPGs recommended by the Spanish Society of Laboratory Medicine and/or retrieved from PubMed-Medline were included. A review of the information provided in CPGs about 80 topics related to the clinical laboratory was performed. The authorship of laboratory professionals was assessed. Results On average, the 16 CPGs addressed 49% (standard deviation [SD]: 11%) of the topics evaluated in relation to the clinical laboratory. By order of frequency, CPGs contained information about 69% of postanalytical variables (SD: 20%); 52% of preanalytical variables (SD: 11%); and 43% of the analytical variables studied (SD: 18%). Finally, half the CPGs included a laboratory professional among its authors. Conclusions CPGs frequently failed to provide relevant laboratory-related information. Laboratory professionals were co-authors in only half the CPGs. There is scope for improvement, and laboratory professionals should be included in multidisciplinary teams involved in the development of CPGs.

Resumen Objetivos Las guías de práctica clínica (GPC) son recomendaciones desarrolladas de forma sistemática para ayudar a profesionales y pacientes en la toma de decisiones sobre la atención sanitaria más apropiada. Destacan entre sus características que deben basarse en la evidencia científica y estar elaboradas por equipos multidisciplinares. El objetivo de este estudio fue evaluar, en GPC, el contenido de la información sobre aspectos propios del laboratorio clínico y la participación de los profesionales del laboratorio en su elaboración. Métodos Se evaluaron 16 GPC recomendadas por la Sociedad Española de Medicina del Laboratorio (SEQC-ML) y/o seleccionadas en PubMed. En cada guía se evaluaron 80 aspectos relevantes relacionados con el laboratorio clínico y la autoría de profesionales del laboratorio. Resultados Las 16 guías evaluadas contenían de media un 49% (DE: 11%) de información sobre los aspectos específicos analizados del laboratorio clínico. Por orden de mayor a menor frecuencia contenían, una información media de: 69% de las variables postanalíticas analizadas (DE: 20%), 52% de las preanalíticas (DE: 11%) y 43% de las analíticas (DE: 18%). Finalmente, la mitad de las guías incluían algún profesional del laboratorio en la autoría. Conclusiones En las guías evaluadas fue frecuente observar carencias en la información sobre aspectos fundamentales del laboratorio clínico y únicamente la mitad de ellas incluía entre los autores a profesionales del laboratorio. Por ello, puede considerarse que todavía existe un margen de mejora amplio y sería recomendable una mayor incorporación de profesionales del laboratorio a los equipos multidisciplinares que las desarrollan.

Objectives Patients with Alport syndrome develop progressive kidney function deterioration, sensorineural hearing loss, and ocular abnormalities. This condition is caused by mutations in COL4A5 (X-linked inheritance), COL4A3 and COL4A4 (autosomal dominant or recessive inheritance), and encoding type IV collagen α3, α4, and α5, respectively. If left untreated, clinical symptoms progress from microscopic hematuria to proteinuria, progressive kidney failure, and end-stage kidney disease. At present, kidney transplantation is the only effective approach. Next-generation sequencing is the method of choice for the diagnosis of this condition. Case presentation We report the case of a young man with chronic kidney disease who eventually underwent transplantation. Molecular testing made it possible to determine the etiology of his clinical symptoms and autosomal recessive Alport syndrome type 2. The patient was found to be a compound heterozygote for two missense variants ( trans configuration) in the COL4A3 gene: A likely pathogenic variant c.4981C>T (p.Arg1661Cys) in exon 52 inherited from the mother (described elsewhere), and another variant of uncertain significance, c.943G>A (p.Gly315Ser), in exon 17 inherited from the father that has not been previously reported in the literature or found in relevant databases. Conclusions Following genetic confirmation, genetic counseling was provided to the patient and his direct relatives.

Resumen Objetivos Los pacientes con síndrome de Alport experimentan una pérdida progresiva de la función renal, pérdida auditiva neurosensorial y anomalías oculares. Está causado por mutaciones en los genes COL4A5 (herencia ligada al cromosoma X), COL4A3 y COL4A4 (herencia autosómica dominante o recesiva), que codifican respectivamente las cadenas α3, α4 y α5 del colágeno tipo IV. En ausencia de tratamiento, el cuadro clínico progresa desde hematuria microscópica hacia proteinuria, insuficiencia renal progresiva y enfermedad renal terminal. En la actualidad, el trasplante renal supone el único tratamiento eficaz. Las pruebas genéticas de secuenciación masiva son el método de elección para el diagnóstico de esta patología. Presentación del caso Se presenta el caso de un varón joven con enfermedad renal crónica que fue finalmente trasplantado, en el que el estudio genético permitió conocer la etiología de su contexto clínico, un síndrome de Alport tipo 2 de herencia autosómica recesiva. Se detectó que el paciente era portador de dos variantes de cambio de sentido en heterocigosis compuesta (configuración trans ) en COL4A3 : una probablemente patogénica c.4981C>T (p.Arg1661Cys) en el exón 52 heredada vía materna previamente descrita y otra de significado clínico incierto c.943G>A (p.Gly315Ser) en el exón 17 heredada vía paterna que no había sido reportada anteriormente en la literatura ni en las bases de datos consultadas. Conclusiones La confirmación desde el punto de vista genético permitió asesorar adecuadamente al paciente y familiares directos.