Cómo manejar las muestras lipémicas para realización de contaje de células sanguíneas (CBC) en los analizadores hematológicos Sysmex

Introducción

La lipemia, definida como la turbidez de la muestra debido a la acumulación de partículas de lipoproteínas, es un problema importante en el laboratorio clínico [1]. Aunque es relativamente poco frecuente, es una dificultad preanalítica importante para la realización del hemograma completo en muestras lipémicas de sangre total por diversas razones. Dado que la mayoría de los analizadores de hematología (AH) miden la hemoglobina mediante espectrofotometría a 530 nm, la lipemia interfiere con la determinación de la hemoglobina, dando lugar a concentraciones falsamente elevadas de hemoglobina y, en consecuencia, una hemoglobina corpuscular media (MCH) y concentraciones de hemoglobina corpuscular media (MCHC) falsamente elevadas [2]. En los análisis de bioquímica y endocrinología, las interferencias por hemólisis, ictericia y lipemia se suelen identificar mediante inspección visual, mediante determinaciones HIL (semi)cuantitativas, o por una combinación de ambas [3]. Por el contrario, la alerta más común que indicaría una muestra de sangre lipémica en el recuento hematológico (CBC) es el aumento de MCHC por encima de un umbral determinado. Aunque algunos autores proponen un punto de corte de 360 g/L para el MCHC para indicar la presencia de lipemia [4], cada laboratorio debe establecer su propio límite para la lipemia, por encima del cual los resultados no se deben ser informados [5]. Los laboratorios de hematología de todo el mundo cuentan con diversos métodos para eliminar la interferencia por lipemia en el conteo sanguíneo completo [6]. Uno de estos métodos empleados es la determinación de la concentración de hemoglobina en muestras de plasma lipémicas centrifugadas. El valor de hemoglobina obtenido en muestras de plasma lipémicas permite una mejor corrección de la concentración de hemoglobina en sangre total. A la concentración de hemoglobina de la muestra de sangre total se le resta la concentración de hemoglobina medida en la muestra de plasma lipémica. A continuación, tras la corrección, se recalculan los valores de MCH y MCHC. Otro procedimiento muy común para eliminar la lipemia es el procedimiento de sustitución de plasma. Dicho procedimiento consiste en eliminar el plasma lipémico y sustituirlo por el mismo volumen de diluyente del analizador, tras lo cual, se vuelve a analizar la muestra. La solución más práctica a la hora de obtener resultados de CBC fiables de las muestras de sangre total lipémicas es emplear analizadores de hematología insensibles a la interferencia por lipemia. El analizador Siemens Advia 2120i cuantifica la concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) celular midiendo directamente la hemoglobina en los eritrocitos intactos. Este método permite determinar con precisión la hemoglobina sin la interferencia por lipemia [7], 8], 9].

En 2019, el Grupo de Trabajo Croata de Hematología de Laboratorio de la Sociedad Croata de Bioquímica Clínica y Medicina de Laboratorio, quiso explorar la práctica habitual de hematología de laboratorio en los laboratorios croatas, con el fin de desarrollar futuras estrategias para la elaboración de recomendaciones nacionales que promuevan la armonización en este campo [5]. La encuesta realizada reveló el uso de diversas estrategias para resolver las interferencias por lipemia en el CBC [5]. La estrategia más común es determinar la concentración de hemoglobina en muestras de plasma lipémicas centrifugadas, que representaban el 40 % de los casos [5]. Sin embargo, dicho método implica una manipulación considerable de la muestra, precisando recalcular los resultados, para garantizar la obtención de unos valores de hemoglobina fiables.

Hasta hace poco, en nuestro laboratorio se utilizaban los analizadores de hematología Siemens Advia 2120i, por lo que la lipemia no suponía ningún problema para la realización de los hemogramas. Posteriormente, estos analizadores fueron sustituidos por los analizadores Sysmex XN-1000. Con el fin de optimizar y estandarizar nuestra práctica, así como garantizar la seguridad del paciente, realizamos un estudio para establecer un protocolo local de interferencia por lipemia para garantizar determinaciones de hemoglobina fiables. Aunque el analizador Sysmex XN-1000 reconoce esta posible interferencia de la muestra, el fabricante no ofrece ninguna solución práctica para la eliminación de la lipemia en la sección de limitaciones del sistema del manual de instrucciones del analizador de hematología automatizado XN series (XN-1000). A raíz de los resultados publicados por Berda-Haddad y col. [10], Sysmex propuso un algoritmo para resolver las determinaciones de MCHC falsamente elevadas. Dicho algoritmo se puede integrar en el extended IPU del laboratorio (EPU), en caso de que se disponga del mismo. Según el algoritmo propuesto por Sysmex, la elevada turbidez de la muestra es una de las posibles causas de la obtención de valores elevados de MCHC, siendo la determinación de hemoglobina óptica en el modo de cuantificación de reticulocitos (Hb-O) un método fiable para eliminar la interferencia por lipemia en las muestras de sangre [11]. Sin embargo, actualmente, la Hb-O solo se utiliza en contextos experimentales y no está incluida en el menú de control de calidad (QC). Por todo ello, evaluamos las características analíticas del nuevo modo que permite la determinación de la hemoglobina óptica y las comparamos con los protocolos de eliminación de lipemia más comunes.

Materiales y métodos

El estudio experimental se realizó en el Servicio de Diagnóstico del Laboratorio Cínico del Hospital Universitario Sveti Duh de Zagreb en Croacia, entre octubre y noviembre de 2024.

Análisis estadístico

Aplicando el diagrama de Bland-Altman, se calculó el sesgo medio entre las determinaciones obtenidas con diversos métodos de eliminación de lipemia y las medidas iniciales. El sesgo medio se expresó en valores porcentuales y se comparó con los criterios de variabilidad biológica para el sesgo, según la base de datos de variación biológica de la Federación Europea de Química Clínica y Medicina de Laboratorio (EFLM) [12]. Se realizó la correlación de rangos para evaluar la posible correlación entre los sesgos calculados y el grado de lipemia, así como la concentración de hemoglobina [13]. Dado que las variables no presentaron normalidad en la distribución, las diferencias entre los tres métodos de eliminación de lipemia se analizaron con la prueba de Friedman. Se consideró estadísticamente significativo un valor p<0,05. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete MedCalc17.4.4^© 23.0.2 (MedCalc Software, Ostend, Bélgica).

Resultados

Discusión

La determinación de Hb-O con el analizador Sysmex XN-1000 manejó con eficacia la interferencia por lipemia en muestras de sangre total EDTA lipémicas. Al reanalizar las muestras en el modo de determinación de reticulocitos, se eliminó la necesidad de realizar los procedimientos manuales tradicionalmente empleados en los laboratorios clínicos para eliminar la interferencia por lipemia.

Aunque se observó una elevación significativa de las concentraciones de hemoglobina (Hb), incluso con la adición más pequeña de lípidos (20 µL), dicha elevación no fue clínicamente significativa si se comparaba con los valores de referencia del cambio (RCV) obtenidos de la base de datos de la EFLM. La concentración de triglicéridos en dichas muestras podía llegar a alcanzar los 10 mmol/L. Sin embargo, la adición suplementaria de la emulsión de lípidos provocó que las concentraciones de Hb superaran la significación clínica en los RCV, lo que nos urgió a reconsiderar el punto de corte de Sysmex para MCHC de 365 g/L como indicador de muestra lipémica para el procesamiento del CBC. Con el propósito de minimizar análisis innecesarios y, a su vez, poder identificar la interferencia por lipemia, sugerimos un umbral para el MCHC más bajo, de 360 g/L, que podría mejorar la gestión de interferencias analíticas y resulta similar a las recomendaciones realizadas por Henry y col. [14].

Otra ventaja de la determinación de Hb-O, frente a los protocolos existentes para la eliminación de la lipemia, es su independencia de los niveles de lipemia y hemólisis. Está ampliamente demostrado que niveles elevados de lípidos se asocian a una hemólisis aumentada, tal como también muestra nuestro estudio [15]. El método tradicional para manejar las interferencias por lipemia en las determinaciones de CBC en Croacia, esto es, determinar la concentración de hemoglobina en muestras de plasma lipémicas centrifugadas, se ve afectado significativamente por el grado de lipemia y hemólisis, generando resultados poco fiables en las muestras con niveles elevados de lipemia. Estos resultados coinciden con los obtenidos por Aruga y col., subrayando la efectividad del método óptico a la hora de medir la hemoglobina en muestras quilosas [16]. Sin embargo, en ese estudio no se realizó una comparación con los métodos tradicionales para eliminar la lipemia.

El presente estudio presenta algunas limitaciones. Los resultados podrían variar según el tipo de emulsión de lípidos empleado para simular la interferencia por lipemia. No obstante, esta es la mejor manera de simular la lipemia en los laboratorios. La falta de un control interno de calidad o la no determinación de la Hb-O suponen una inquietud potencial con respecto al uso de este parámetro experimental en los análisis clínicos rutinarios. Aunque la Hb-O mostró una mayor imprecisión total que las concentraciones de Hb medidas mediante espectrofotometría, la imprecisión observada cumplía con los requisitos de aceptación de Sysmex. Las muestras de QC interno de Sysmex se pueden seguir validando para la determinación de Hb-O en diferentes lotes de QC.

A pesar de sus pequeñas limitaciones, este estudio demuestra que la determinación de Hb-O en HA Sysmex es superior a la hora de eliminar la interferencia por lipemia que los métodos de eliminación de lipemia empleados actualmente en los laboratorios de todo el mundo, incluida Croacia. Este es un método sencillo para estandarizar el protocolo de eliminación de la lipemia en las mediciones del recuento sanguíneo completo (CBC) sin precisar la manipulación de las muestras. Las técnicas de eliminación de lipemia suelen implicar la manipulación de la muestra, lo que puede provocar un sesgo significativo, pudiendo derivar en resultados erróneos, y comprometiendo con ello la seguridad del paciente [17], 18]. Finalmente, la adopción de un procedimiento sencillo y seguro para la eliminación de la lipemia mediante la medida directa de la Hb-O podría reducir la carga de trabajo global en los laboratorios, aliviando la ampliamente reconocida escasez de personal [19].